心肌肌钙蛋白(CardiacTroponin,cTn)包含三种不同亚基:心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和心肌肌钙蛋白C(cTnC),如图1所示,三者临床价值相近。cTn作为心肌损伤的特异性生物标志物,是包括急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfarction,AMI)在内的急性冠状动脉综合征(AcuteCoronarySyndrome,ACS)的实验室诊断指标,也是门急诊常规检验项目之一,有较高的TAT要求(样本送检后1h内报告检验结果)[1]。
图1cTn组成,心肌损伤时cTn释放入外周血循环
鉴于cTn升高有非常重要的临床参考价值,同时纠错时间极其有限,检验影响因素多,检测结果稍有差错,就有可能直接影响到临床诊疗,造成医疗事故。所以,即便不少检验工作者把检验前中后工作做到极致严谨,也不免遇到类似如下让人纠结烦“心”的情况:
某院检验科老师周末值班时,遇到一例患者,主诉“感冒、反复胸闷、胸痛伴头痛半月”入院,cTnI检测结果大幅升高(7.62ng/mL,参考范围:≤0.04ng/mL,AMI诊断危急值为0.5ng/mL),但影像、彩超均未发现心肌损伤、心肌缺血证据,仅hsCRP轻度升高,血常规提示病*感染可能,其他检查结果都正常。临床暂时排除心脏相关疾病,希望检验科排查cTnI大幅升高原因,以免耽误进一步诊疗。检验科老师在确认检验过程无误后,把样本二次离心后复检,结果依然如前,一时让他陷入两难,于是向小迈求助。
到底是什么原因导致如此烦“心”的cTnI检测结果呢?正如年10月最新发布的中国专家共识[2]所言,一切得从干扰cTn检测的影响因素说起。1干扰cTn检测的影响因素
1.1外源性干扰因素
1.1.1样本状态和贮存条件不合格
溶血、脂血、*疸样本,一般对cTn检测产生负向干扰,导致测值异常下降。样本室温保存超过6h,则可能导致测值异常升高。
1.1.2离心不充分
cTn的TAT较短,一般采用血浆抗凝样本,如果离心转速和时间未能充分按照试剂厂家要求执行,可能导致纤维蛋白凝块、微颗粒等仍悬浮于样本上清血浆中,可对cTn检测产生正向干扰,导致测值异常升高。
1.1.3检测系统异常
仪器故障、未及时维护、试剂变质等都可能对检测结果产生不同程度的影响,尤其如果分析系统存在携带污染,可令样本cTn测值异常升高。cTn免疫分析通常采用免疫夹心法,定标/校准点测值偏低会导致标准曲线整体负偏,令质控和所有样本测值都异常升高。
对于以上三点影响因素,一般可以通过加强对检验前中后的把控来避免。但对于样本内源性干扰因素,我们除了要有充分认识以外,还要建立足够的预防应对流程,才能做到未雨绸缪,及时准确报告cTn检验结果。
1.2内源性干扰因素
1.2.1生物素
正常膳食、日常补充复合维生素、美发美甲、生物素治疗等是人体摄入生物素常见途径,当生物素摄入量过大(>5mg/d),可影响采用生物素-链霉亲和素分析方法的检测系统,导致cTn测值异常下降[3]。
1.2.2高浓度碱性磷酸酶
可干扰采用碱性磷酸酶分析方法的检测系统,导致cTn异常升高。
1.2.3异嗜性抗体(HeterophilicAntibody,HA)
HA是影响cTn检测的重要内源性干扰因素之一。医院检验科鲁*等[4]报道一例胃部疾病排除心肌损伤可能的患者,其cTnI连续多次检测稳定在高水平(4~6.05ng/mL),经干扰排查,确定为HA干扰。此外,李阳等[5]和陈超超等[6]均有类似报道。国外Lippi等[7]回顾分析了17项研究(如表1所示),发现HA对多家国际知名厂家的免疫分析系统检测cTn均有不同程度的干扰,总体干扰概率在0.1%-3.1%,而嗜肺*团菌感染患者的HA干扰概率则近50%!
表1HA处理前后样本cTn测值差异较大,HA对多家国际知名厂家的免疫分析系统检测cTn均有不同程度的干扰
常见易行的HA干扰确认措施有以下三种方法(上下滑动查看)。
(1)稀释法,把样本在最大稀释倍数内进行倍比稀释,计算稀释后回收率,如各稀释度下回收率在可接受范围内(1/2TEa或±20%)则说明分析过程没有受HA干扰,反之,则说明分析过程受到了HA干扰,但稀释法无法很好地消除干扰;
(2)聚乙二醇(PEG)沉淀试验,配制成25%质量分数溶液,1:1混合待测血清,充分混合后离心去上清测定,测值乘以2;测值较沉淀试验前显著下降,则说明分析过程受到了HA干扰,同时可大幅消除干扰;
(3)HA阻断试验(HBT),向HBT管中加入适量样本,孵育一段时间,让HA阻滞剂对样本中的HA进行封闭,然后再进行检测。测值较阻滞试验前显著下降,则说明分析过程受到了HA干扰,同时可大幅消除干扰;具体操作请见所用HA阻滞剂的试剂说明书。
1.2.4其他内源性干扰因素
急性严重骨骼肌损伤可导致cTn动态变化与AMI相似,而慢性严重的骨骼肌损伤如横纹肌溶解[8],胎儿骨骼肌蛋白重表达导致的与心肌的交叉反应,巨球蛋白血症等等,都可能引起cTn假性升高。
需要注意的是,对于疑似轻度心肌损伤、非ST段抬高型ACS(NSTE-ACS)患者,首次hs-cTn(高敏肌钙蛋白)测值在参考范围上限的5倍以内,则需要进入“0-1h”或0-2h”或“0-3h”诊断流程,动态监测cTn水平,评价前后两次测值的变化幅度才有临床参考意义,这就需要我们保证分析系统有较好的重复性(总CV≤10%),同时前后两次检测必须使用同一分析系统[2]。
另外,非心脏疾病如慢阻肺、肺栓塞、重症肺炎、肾衰竭、脓*血症、过度劳累、卒中等都可见cTn升高[9];巨肌钙蛋白复合物、肌钙蛋白编码基因突变则可导致假性降低[2]。
综上所述,我们分析cTn结果时要考虑以上病理情况,做好充分的鉴别排除。
2案例分析
在小迈建议下,检验科老师对问题样本进行倍比稀释试验,稀释后回收率都超过可接受范围,于是将稀释试验结果和cTnI检测受干扰的文献报道,告知临床,怀疑样本存在某种干扰物质,需要外送验证。临床当即表示理解并排除患者ACS可能,对患者以抗病*治疗为主。外送HBT试验、PEG沉淀试验、稀释回收试验均提示HA干扰(如表2-3所示)。结合患者免疫球蛋白、类风湿因子、补体、抗核抗体、TORCH/EB病*IgM等均无异常,确定cTnI检测结果是受其他类型HA干扰。患者在抗病*治疗下,病情逐渐好转,3天后出院。
表2患者样本cTnIHBT阻断试验、PEG沉淀试验、稀释回收试验结果
表3cTnI阳性对照HBT阻断试验、PEG沉淀试验、稀释回收试验结果
针对干扰cTn检测的各类影响因素,我们推荐以下预防应对流程,希望能帮助大家审核cTn检测结果时,少点纠“心”,更加省心。3预防应对流程推荐
3.1如果存在以下情况之一,应考虑cTn检测结果受到了干扰(上下滑动查看):
3.1.1检测结果与临床表现、资料不符,如测值显著升高但无相关疾病表现;3.1.2其他相关检查结果,如AST、LDH、aHBDH、CK、CK-MB、MYO、心电图、影像超声检查等均正常,但cTn单独升高;3.1.3用其他方法检测该标本,测量值有明显差异或阴阳不符;3.1.4与历史的检测结果相差较大且无法解释;3.1.5自身免疫性疾病患者,且存在3.1.1-3.1.4其中一种情况;3.1.6近期免疫接种、输血或者接受单克隆抗体治疗,且存在3.1.1-3.1.4其中一种情况;3.1.7兽医以及与动物接触密切的患者,且存在3.1.1-3.1.4其中一种情况;3.1.8稀释样本后,检测结果不呈线性关系,稀释回收率超过±1/2TEa;
3.1.9用阻滞剂处理后,结果有明显差异。
3.2排查确认cTn检测结果是否存在干扰,推荐以下应对流程(上下滑动查看):
3.2.1确认试剂、校准、质控、检测系统精密度是否正常,同一分析批其他结果是否全部异常,排除检测系统问题;3.2.2及时复核样本状态,判断是否由于样本状态异常导致,重点